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PNAS/Q1 云序生物助力苏大陶金团队揭示m6A介导神经病理性疼痛新机制

发布时间:2024-07-04 10:46 |  点击次数:

RNA m6A修饰是一种新兴的表观遗传调控机制,已经被证明参与了各种病理生理过程.然而,人们对其参与调节神经病理性疼痛的情况仍然知之甚少。云序生物助力苏州大学陶金教授团队在PNAS上发表题为“FOXD3-mediated transactivation of ALKBH5 promotes neuropathic pain via m6A-dependent stabilization of 5-HT3A mRNA in sensory neurons”的研究论文,该文阐明了m6A去甲基化酶ALKBH5在调节三叉神经介导的神经病理性疼痛中的功能作用,提示ALKBH5可能作为三叉神经病理性疼痛潜在的治疗靶点。云序生物有幸提供了该研究中m6A meRIP-seq与生信分析服务,同时本研究中涉及的验证服务云序生物也均可提供,欢迎老师们线下线上咨询!

标题: FOXD3-mediated transactivation of ALKBH5 promotes neuropathic pain via m6A-dependent stabilization of 5-HT3A mRNA in sensory neurons

发表时间:2024.1.29

发表期刊:PNAS/Q1

样品类型:大鼠 三叉神经节(3 vs 3)

研究方法:m6A meRIP-seq、Chip-qPCR、m6A meRIP-qPCR、RIP-qPCR、RIP-WB

 

研究摘要

 

在这项研究中,作者阐明了 m6A 去甲基化酶ALKBH5在调节三叉神经介导的神经病理性疼痛中的功能作用。周围神经损伤选择性地上调了大鼠损伤三叉神经节(TG)中 ALKBH5 的表达水平。阻断损伤三叉神经节中的这种上调可减轻三叉神经痛,而在完整的三叉神经节神经元中模拟 ALKBH5 的上调可充分诱导与疼痛相关的行为。从机制上讲,神经损伤诱导的组蛋白去乙酰化酶11下调会增加组蛋白H3K27ac,促进转录因子叉头框蛋白D3(FOXD3)与Alkbh5启动子结合,促进Alkbh5的转录。ALKBH5的增加会清除Htr3a mRNA中的 m6A 位点,导致YTHDF2无法与Htr3a mRNA 结合,从而引起 5-HT3A 蛋白表达和 5-HT3 通道电流的增加。相反,阻断 ALKBH5 在损伤 TG 中的表达,可破坏神经损伤诱导的 5-HT3A 增加的稳定性,并逆转机械性疼痛,这种效应可被5-HT3A 敲除所阻断。总之,FOXD3 介导的 ALKBH5 反式激活通过 m6A 依赖性稳定 TG 神经元中的 Htr3a mRNA 来促进神经病理性疼痛。对这一机理的理解可能会推动神经病理性疼痛治疗新靶点的发现。

 

 

技术路线

 

 

研究结果

 

(1)外周神经损伤后,ALKBH5在同侧Tg神经元中表达上调

利用单侧眶下神经慢性收缩性损伤(CCI-ION)建立了三叉神经痛的实验模型。与假手术组相比,大鼠在 CCI-ION 后第 14 天对机械刺激的逃逸阈值急剧下降,并且这种下降在第 28 天仍保持不变。Dot blot结果表明,CCI-IION后同侧 TG 中 m6A 的总体水平明显下降。为了确定m6A 水平变化的关键分子,作者检测了 CCI-ION后受损TG中m6A甲基化转移酶和去甲基化酶的表达,结果发现单侧 CCI-ION 增加了同侧 TG 中 Alkbh5 mRNA 的水平,而 Fto、Wtap、Mettl3 和 Mettl14 则保持不变。随后研究了同侧 TG 中Alkbh5 表达变化的时间过程。CCI-ION 大鼠的 Alkbh5 mRNA 水平在第 14 天显著增加,并在第 28 天保持不变,而假手术组大鼠的 Alkbh5 mRNA 水平没有显著差异。同样,ALKBH5 蛋白表达在 CCIION 手术大鼠中以时间依赖性的方式显著增加,而 FTO、WTAP、METTL3 和 METTL14 的蛋白丰度在第 14 天和第 28 天没有明显变化。不出所料,假手术组同侧TG中ALKBH5的基础表达保持不变,在CCI-ION 手术后,对侧 TG 中的 ALKBH5 蛋白表达也没有发生任何变化。接下来研究了 ALKBH5 的细胞定位。双染结果显示,ALKBH5 主要与神经元标记物 NeuN 共存,而很少与卫星胶质细胞特异性标记物谷氨酰胺合成酶(GS)共定位,这表明 ALKBH5 主要在 TG 神经元中表达。统计分析显示,约 93.3% 的 ALKBH5+ TG 神经元被 NeuN 标记,约 2.7% 被 GS 标记。进一步检测ALKBH5在正常大鼠外周痛觉感受器中的表达模式表明,ALKBH5 阳性的 TG 神经元与降钙素基因相关肽(CGRP)和异凝集素B4 ( IB4 )高度共存,但与神经丝蛋白 200(NF200)的共存率相对较低。约 32.7%的ALKBH5阳性神经元被CGRP标记,约 39.5% 被IB4 标记,16.9%被NF200 标记。此外,与 qPCR 结果一致,在CCI-ION 后第14天,同侧TG中的ALKBH5 阳性神经元数量与相应的假手术组相比显著增加(增加了 49.2% ± 3.8%)。

 

 

图1 .神经损伤后ALKBH5在同侧TG中表达上调

 

 

(2)ALKBH5调控三叉神经病理性疼痛行为

为了研究ALKBH5是否参与慢性神经病理性疼痛行为,作者在CCI-ION 14d后单侧在TG内注射了化学修饰的ALKBH5-siRNA(及相应的阴性对照NC-siRNA)。结果显示ALKBH5-siRNA(而非 NC-siRNA)显著抑制损伤 TG 中 ALKBH5 蛋白丰度的增加,并明显缓解 CCI-ION 诱导的机械痛觉。随后,作者利用慢病毒介导的shRNA研究了ALKBH5敲除(ALKBH5-down)对神经病理性疼痛行为的影响。在CCI-ION 后 14 d 注射 ALKBH5-down 抑制了损伤 TG 中 ALKBH5 的蛋白丰度,并显著减轻了注射ALKBH5-down后第 3 天至第 14 天的机械痛感和热痛觉过敏。为了验证假设,进一步的口面部行为评估显示,ALKBH5-down能逆转CCI-ION诱导总接触时间减少,而NC-down处理则没有这种效果。此外,在CCI-ION手术前注射ALKBH5-down后,评估了ALKBH5参与神经病理性疼痛发展的情况。与NC-down处理组相比,用ALKBH5-down预处理的CCI-ION大鼠在术后第14至21天的机械异感显著减少。接下来研究了在完整的 TG 中模拟神经损伤后 ALKBH5 的增加是否会改变痛觉阈值。利用 eGFP 标记的慢病毒载体 lenti-hSyn-ALKBH5up (ALKBH5-up)进行神经元特异性基因递送,诱导 ALKBH5 在 TG 神经元中特异性表达。从TG内注射后第3天开始,直接注射ALKBH5-up后可在完整的TG神经元中观察到eGFP表达,并可维持21天。同样,注射 ALKBH5-up 后第 3 天,ALKBH5 的蛋白表达显著上调。在完整大鼠中,单侧TG内注射ALKBH5-up可在注射后第3天明显诱导机械超敏反应,这种超敏反应至少持续14天,而NC-up处理则没有这种效应。这些行为学结果共同证明了ALKBH5在三叉神经介导的神经病理性疼痛的发病机制中起着关键作用。

 

图 2. ALKBH5调控痛觉行为

 

 

(3)FOXD3在CCI-ION后促进Tg Alkbh5基因转录活性

基因转录是由与启动子结合的序列特异性转录因子控制的。为了阐明可能调控 ALKBH5 表达的转录因子,对 Alkbh5 转录起始位点上游约 2,000 bp(-2,129 bp 至 0 bp)的 5′ 区域进行了缺失分析。构建了一系列 pGL3 荧光素酶报告质粒,其中包含 Alkbh5 启动子区域的不同片段(pGL3-F1 至 pGL3-F5)。双荧光素酶报告实验显示,与pGL3-F2 相比,只有 pGL3-F3 质粒(-2,129 bp 至 -874 bp)的荧光素酶活性显著降低,这表明从 -874 bp 至 -393 bp(ΔF)的启动子区域含有对 Alkbh5 基因表达至关重要的顺式调控元件(CRE)。此后,利用 JASPAR 数据库确定了 Alkbh5 基因启动子ΔF区域内的转录因子结合位点。共鉴定出三种转录因子: MAFB、FOXD3和SP1。为了确定转录因子与 Alkbh5 启动子 ΔF 区域的相互作用,构建了携带 ΔF 区域的荧光素酶报告质粒,并将其单独与 MAFB、FOXD3 以及SP1 质粒进行转染。其中ΔF区单独与FOXD3共转染,显著增强荧光素酶活性。因此,作者进一步研究了 FOXD3 水平是否与 ALKBH5 表达的增加相关。免疫染色分析显示,FOXD3与ALKBH5在正常大鼠的TG神经元中强烈共表达。令人惊讶的是,从神经损伤后第 0 天到第 28 天,FOXD3 的表达在损伤的 TG 中没有受到明显影响。在假手术组中也观察到了类似的结果。鉴于上述情况,推测神经损伤导致的 ALKBH5 变化可能是 FOXD3 与 Alkbh5 基因启动子区域结合的变化。Chip-qPCR分析显示,与假手术相比,CCIION后14 d时抗FOXD3复合物对Alkbh5启动子的富集程度明显更高。

 

图3. FOXD3在CCI-ION后促进 TG Alkbh5 基因的转录活性

 

 

(4)HDAC11下调增强FOXD3与ALKBH5的结合

组蛋白乙酰化是控制基因表达的重要表观遗传机制。值得注意的是,组蛋白 H3 赖氨酸乙酰化(包括 H3K27ac、H3K18ac、H3K14ac 和 H3K9ac)以及组蛋白 H4(H4ac)的乙酰化均与转录激活相关。因此,作者检测了 TG 组织中这些乙酰化组蛋白同工酶的蛋白丰度。与假手术相比,只有 H3K27ac 蛋白水平在 CCI-ION 手术 14 d 后显著上调,而其他乙酰化组蛋白 H3 和 H4 没有明显变化。随后的免疫染色分析显示,在 CCI-ION 或假手术的 TG 神经元中,H3K27ac 只在 TG 细胞核中表达,并与 ALKBH5 共定位。特别是,在 CCI-ION 大鼠中,大多数 H3K27ac 高表达的 TG 神经元也显示出强烈的 ALKBH5 染色。此外,Chip-qPCR分析显示抗 H3K27ac 复合物扩增了 Alkbh5 启动子片段。与假手术相比,在 CCI-ION 14 d 后,H3K27ac 与 Alkbh5 基因启动子的结合明显增强(约 2.7 倍)。此外,与术后 7 d 的 CCI-ION 组相比,CCI-ION 14 d 后同侧 TG 中 H3K27ac 与 Alkbh5 基因启动子的结合活性显著增加。与此相反,CCIION 后 7 d 的损伤 TG 中 Alkbh5 基因启动子中 H3K27ac 结合的富集程度没有变化。已知的组蛋白乙酰化酶 CBP、EP300、HAT1、KAT2A 和 KAT5 可使 H3K27发生乙酰化,而包括 HDAC1 至 HDAC11 在内的组蛋白去乙酰化酶可使 H3K27 去乙酰化。qPCR 分析表明,在 CCI-ION 术后14 d 后,Hat1 和 Hdac11 的 mRNA 表达量显著下降,而其他去乙酰化酶或乙酰化酶没有显著变化。值得注意的是,在蛋白质水平上,只有 HDAC11 的丰度在 CCI-ION 后以时间依赖的方式持续下调,而 HAT1 蛋白的丰度没有表现出任何显著变化。在假手术中,HDAC11和 HAT1的蛋白丰度在测试期间保持不变。这些结果表明,H3K27ac 的增加可能是由于 TG 中 HDAC11 的下调。此外,TG切片的免疫染色显示,在CCI-ION和假手术大鼠中,HDAC11与ALKBH5共定位。在 CCI-ION 组和假手术组中,HDAC11 主要存在于细胞核中(用DAPI 标记),而且大多数 ALKBH5 水平较高的神经元在受伤的 TG 中显示出相对较低的 HDAC11 水平。进一步研究了 HDAC11 是否在功能上参与了 CCI-ION 介导的机械痛觉。TG 内注射 lenti-hSyn-HDAC11-up (HDAC11-up)可防止 CCI-ION 诱导的 H3K27ac或 ALKBH5蛋白丰度的增加。在受伤的TG内注射HDAC11-up可显著减少FOXD3与Alkbh5启动子的结合,并明显减轻CCI-ION诱导的机械性痛觉。此外,作者还探讨了在完整的TG中模拟神经损伤诱导的HDAC11减少是否会改变痛觉行为。在完整大鼠体内施用 HDAC11-siRNA 会显著增加 H3K27ac 蛋白丰度。还探讨了在完整的TGs中模拟神经损伤导致的HDAC11减少是否会改变伤害性行为。在正常大鼠中注射HDAC11 - siRNA可显著增加H3K27ac和ALKBH5的蛋白丰度,并增强FOXD3与Alkbh5启动子的结合。此外,接受单侧TG内注射HDAC11 siRNA的完整大鼠在注射后第3天至第7天出现明显的机械性超敏反应。

 

图 4. HDAC11 下调会增强 FOXD3 与 ALKBH5 的结合

 

 

(5)ALKBH5介导的m6A修饰增强了Htr3A mRNA的稳定性

研究人员接下来探讨了ALKBH5调控神经病理性疼痛的潜在分子机制。鉴于 LKBH5 是 m6A的关键去甲基化酶,因此进行了 m6A meRIP-seq(3 vs 3),以分析 NC上调和 ALKBH5 上调处理的 TG 细胞的 m6A 甲基化分布。

与之前的分析一致,大鼠TG中富集了m6A典型motif RRACH(R = A 或 G;H = A、U 或 C),m6A 峰在靠近终止密码子的 3′-UTR 附近富集。通过比较NC up处理组和ALKBH5-up处理组之间的m6A峰丰度,发现共有1345个m6A-up峰和546个m6A-down峰。GO分析表明,m6A位点减少的转录本富集于离子转运活性和阳离子通道复合物,KEGG分析表明它们与钙信号转导高度相关,而钙信号转导在疼痛调控中起着关键作用。将上述 GO 和 KEGG 分析结果基因联合进行交集分析,共得出了 10 个候选基因。在这10个转录本中,有4个转录本(Htr3a、Pkd1l3、Ptk2b 和 Trpc6)在 ALKBH5上调处理的 TG 中的表达水平显著升高,其中 Htr3a 的上调幅度最大(约 191.6%)。事实上,如 m6A meRIP-seq分析所示,与 NC-up 组相比,ALKBH5-up 处理的 TG 的 Htr3a mRNA 在 3′-UTR 中的 m6A 位点下调较多。 m6A meRIP-qPCR分析进一步验证了这些结果,结果显示 ALKBH5-up 能显著降低完整 TG 中 Htr3a mRNA 的m6A水平,假手术中TG的Htr3a mRNA片段中富含m6A,而在CCI-ION 14 d后,损伤的TG中明显降低,这表明神经损伤诱导了m6A位点的缺失。此外作者还研究了这种m6A下调与ALKBH5 活性的关系,RIP-qPCR分析表明,ALKBH5 的特异性抗体可以扩增Htr3a mRNA片段,并且这种结合活性在 CCI-ION 14 d 后显著升高。由于 ALKBH5 的过表达可能会增加 Htr3a mRNA 的水平,作者研究了 m6A 修饰是否会影响 Htr3a mRNA 的稳定性。在转录抑制剂fang线菌素 D 的存在下,ALKBH5 的过表达会延长 Htr3a mRNA 的半衰期,这表明 m6A 修饰介导了 ALKBH5 增强 Htr3a mRNA 的稳定性。由于reader对 m6A修饰的转录本的直接影响起着关键作用,进一步确定了参与上述过程的潜在效应因子。研究表明,已鉴定的m6A reader,包括YTHDF1 / 2 / 3和YTHDC1 / 2以及G3BP1,参与促进靶基因的不稳定性。因此检测了神经损伤是否会影响这些reader在损伤的TG中的表达。令人惊讶的是,所有这些阅读器的蛋白质丰度在CCI - ION 后的第7天到第28天没有明显的变化。进一步通过RIP-qPCR检测Htr3a mRNA与m6A reader蛋白的结合,发现通过YTHDF2 特异性抗体富集可以扩增出Htr3a mRNA片段,并且在CCI - ION后14 d,这种结合显著降低。ALKBH5介导的m6A修饰通过YTHDF2依赖的mRNA降解抑制Htr3a的表达。作为对这一假设的补充,TG切片的双重免疫荧光分析显示,在大鼠TG神经元中,无论是ALKBH5还是YTHDF2,都与5 - HT3A有很强的共定位。

 

图 5. ALKBH5 介导的 m6A 修饰增强了 Htr3a mRNA 的稳定性

 

 

(6)5-HT3A在CCI后损伤的Tg中表达上调

作者评估了TG 5-HT3A在调节三叉神经介导的神经病理性疼痛行为中的潜在作用。与假手术组相比,在 CCI-ION 手术后 14、21 和 28 d,同侧 TG 中 5-HT3A 蛋白表达水平显著增加,而 5-HT3B 蛋白丰度没有变化。不出所料,假手术组的 5-HT3A 或 5-HT3B 蛋白表达也没有明显变化。接下来研究了 5-HT3A 的细胞定位。对完整大鼠 TG 切片的双重标记分析表明,5-HT3A 主要与 NeuN 共存,但很少与 GS 共定位,这表明 5-HT3A 主要在 TG 神经元中表达。此外,5-HT3A 与 CGRP 和 IB4 有很强的共聚焦作用,但在 NF200 阳性神经元中的表达相对较少。接下来测定了神经损伤引起的 5-HT3A 蛋白丰度增加是否会改变逆向标记的小 TG 神经元中的 5-HT3 电流。结果显示,CCI-ION 明显增强了 5-HT3 电流。峰值电流密度从假组的 10.8 ± 0.6 pA/pF 增加到 CCI-ION 组的 15.8 ± 1.2 pA/pF。5-HT3A 表达增加的功能意义在整个动物水平上得到了进一步检验。昂丹司琼(1 μM)是一种特异性 5-HT3 阻断剂,可显著降低 CCI-ION 组和假手术组的 5-HT3 电流。TG 内注射昂丹司琼(1 nmol)可减轻 CCI-ION 大鼠的机械异感。在假手术中,TG 内注射昂丹司琼或药物均不会改变基础阈值。为了进一步确定 CCI-ION 诱导的 5-HT3 电流增加是否是由 5HT3A 同工酶引起的,我们通过化学修饰 siRNA 敲除了受伤 TG 中的 5-HT3A。在 TG 内注射 5-HT3A-siRNA 显著降低了 CCI-ION 介导的 5-HT3A 蛋白丰度的增加和 5HT3 电流的增加。

 

图6. CCIION 术后 TG 中 5-HT3A 上调

 

 

(7)5 - Ht3A负责ALKBH5介导的痛觉行为

作者进一步研究了调节 ALKBH5 是否会改变 CCI-ION 后 TG 5-HT3A 蛋白的表达和功能。施用 ALKBH5-siRNA 明显抑制了 CCI-ION 后损伤 TG 中 5-HT3A 蛋白丰度的增加。ALKBH5-siRNA的应用也阻止了 CCI-ION 诱导的逆向标记的小 TG 神经元中 5-HT3 电流的增加。此外,为了探索在完整的TG神经元中模拟CCI-ION诱导的ALKBH5增加是否会改变5-HT3A的表达。WB表明ALKBH5-up 处理的 TG 中 5-HT3A 蛋白丰度显著增加。对小 TG 神经元的进一步记录表明,ALKBH5 的过表达能显著增强 5-HT3 电流。为了验证 5-HT3A 是否真正介导了 ALKBH5 诱导的疼痛行为,在 TG 内注射 ALKBH5-siRNA 的同时在 TG 神经元中注射了 5-HT3A-siRNA 。第 0 天注射 5-HT3A-siRNA,第 3 天注射 ALKBH5-siRNA。与 NC-siRNA 组相比,注射 5-HT3A-siRNA 明显减轻了 CCI-ION 诱导的机械异感。从第 3 天到第 5 天,ALKBH5-siRNA 体内注射后的逃逸阈值保持稳定,这表明进一步注射 ALKBH5-siRNA (第 3 天)不会对 CCI-ION 诱导的机械痛觉产生任何叠加效应。在TG内注射ALKBH5-siRNA后,逃逸阈值从第3天到第5天保持稳定,这表明继续注射ALKBH5-siRNA(第3天)不会对5-HT3A-siRNA预处理的CCIION大鼠的逃逸阈值产生任何叠加效应。相比之下,TG 内注射 ALKBH5siRNA 能显著提高 NC-siRNA 处理的 CCIION 大鼠对机械刺激的逃逸阈值(图 7E)。因此,5HT3A 是 ALKBH5 介导的痛觉行为的元凶。

 

图 7. 5-HT3A 是 ALKBH5 介导的痛觉行为的原因

 

全文小节

 

大鼠损伤三叉神经节(TG)中 ALKBH5 的上调可充分诱导疼痛相关行为。

神经损伤诱导的组蛋白去乙酰化酶11下调增加组蛋白H3K27ac,从而促进转录因子FOXD3与Alkbh5启动子结合,促进其转录。

ALKBH5的增加下调Htr3a mRNA中 m6A修饰,导致YTHDF2无法与Htr3a mRNA 结合从而增加其稳定性,增强 5-HT3A 蛋白表达和 5-HT3 通道电流。

 

云序生物m6A修饰研究五大模块

 

01 m6A RNA修饰测序

m6A RNA修饰单碱基测序(m6A-GLORI-seq)北京大学官方授权专利技术

GLORI-Seq(Glyoxal and nitrite-mediated deamination of unmethylated adenosine)技术是针对m6A修饰开发的单碱基检测技术。实现了真正意义的高效率、高灵敏度、高特异性、无偏好单碱基m6A位点检测,解决了目前m6A后续研究中众多科研工作者遇到的无法精确m6A突变位点的难题。

m6A RNA修饰测序(m6A-MeRIP-seq)

对m6A RNA甲基化,目前流行的检测手段为m6A-MeRIP-Seq技术,适用于m6A RNA甲基化谱研究,快速筛选m6A RNA甲基化靶基因。云序可提供mRNA和多种非编码RNA的m6A测序:

m6A 全转录组测序(涵盖mRNA,LncRNA,circRNA)

m6A  LncRNA测序(涵盖LncRNA和mRNA)

m6A  Pri-miRNA测序(涵盖Pri-miRNA和mRNA)

m6A  mRNA测序

m6A  miRNA测序

 

02检测整体m6A RNA修饰水平

比色法检测整体RNA修饰水平

快速检测m6A整体甲基化水平

 

03 m6A RNA修饰上游酶的筛选

m6A RNA修饰相关酶PCR芯片

寻找上游直接调控m6A RNA甲基化的甲基转移酶。

 

04 m6A RNA修饰靶基因验证

MeRIP-qPCR/GenSeq® MeRIP试剂盒

云序提供各类不同修饰的MeRIP-qPCR服务以及销售GenSeq® MeRIP试剂盒,可针对mRNA,lncRNA,环状RNA等不同类型的RNA分子进行检测,低通量验证RNA修饰靶基因表达水平。

 

05机制互作研究

5.1 RIP-seq/qPCR/GenSeq® RIP试剂盒

筛选或验证RNA修饰直接靶点,研究RNA修饰靶基因的调控机制。

5.2 RNA pull down -MS/WB

筛选或验证目标RNA互作基因或蛋白,研究相应的分子调控机制。

5.3 ChIP-seq

筛选或验证目标蛋白与DNA互作,研究相应的分子调控机制。

5.4 Ribo-seq

筛选翻译水平发生变化的RNA分子,研究相应的分子调控机制。

5.5 SLAM-seq

筛选稳定性发生变化的RNA分子,研究相应的分子调控机制。

5.6 CHIRP-seq

筛选或验证目标RNA与DNA互作,研究相应的分子机制。

 

云序生物服务优势

优势一:云序累计支持客户发表数百篇SCI论文,合计影响因子3000 +

优势二:累计完成测序样本数万例,全面覆盖医口、农口等各类样本

优势三:全面检测mRNA和各类非编码RNA(circRNA,lncRNA,Pri-miRNA等)

优势四:提供RNA修饰一站式服务:整体水平检测、merip-seq、MeRIP-qPCR验证、RIP-seq/eclip-seq、RNA pull-down、Ribo-seq/Polysome-seq和SLAM-seq等

优势五:率先研发超微量MeRIP测序技术,RNA量低至500ng起

优势六:国内较全的RNA修饰测序平台,提供m6A、m5C、m1A、m7G、m3C、O8G、ac4C乙酰化和2'-O-甲基化、假尿嘧啶等修饰的测序技术

 

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