迄今为止，已有160多种RNA修饰被发现，真核生物中除了最常见的m6A修饰以外，科学家也发现了一种位于真核生物mRNA 5‘帽端的RNA可逆修饰m6Am，即在 m6A 修饰的基础上，同一个腺苷酸残基的核糖的 2’ 羟基也被甲基化，产生 2’ 甲氧基结构（2’-O-CH3）。研究发现m6Am修饰在50-80%的哺乳动物中都存在，并在细胞生命过程中通过影响mRNA的蛋白翻译效率发挥重要作用。
目前已有多篇m6Am文章在高分期刊进行了报道（如表1），2017年《Nature》上发表了一篇m6Am在5‘端修饰影响mRNA稳定性的文章，说明了m6Am在mRNA修饰在生命过程中的重要作用。但针对m6Am修饰的研究仍有很大空缺，云序基于m6Am在mRNA上帽端修饰的特点开发出了m6Am-exo-seq技术，可高效准确的鉴定m6Am的修饰位点及修饰水平，为想要研究m6Am RNA修饰的客户提供坚实的技术基础！

A. 技术原理
首先将RNA样品片段化为200nt左右的片段，利用5‘外切酶消化不包括帽子结构的RNA片段，使具有帽子结构的RNA片段富集。然后对富集的RNA片段进行m6A抗体的免疫沉淀反应，从而富集发生m6Am修饰的RNA片段。对IP富集的产物进行PCR扩增及纯化，纯化后进行文库质检，之后上机测序。根据测序结果分析m6Am甲基化富集峰情况。

B.m6Am-exo-seq流程
C.m6Am-exo-seq质控
1. RNA定量质控 2. 文库2100质控
通过Agilent生物分析仪对测序文库进行质控。 3. 测序Q30质控 4. 测序Read统计
D. m6Am甲基化测序数据展示
1. 甲基化位点识别 chr：甲基化位点（峰）所在的染色体号
Start：甲基化位点（峰）在基因组上的起始坐标
End：甲基化位点（峰）在基因组上的终止坐标
Peak ID：甲基化位点的编号
Score：甲基化位点的得分
PeakLenght：甲基化位点的长度
fold_enrichment：富集倍数
FDR：甲基化位点的 FDR
2. 差异甲基化位点识别 chr：甲基化位点（峰）所在的染色体号
Start：甲基化位点（峰）在基因组上的起始坐标
End：甲基化位点（峰）在基因组上的终止坐标
Peak ID：甲基化位点的编号
Score：甲基化位点的得分
PeakLenght：甲基化位点的长度
Foldchange：差异甲基化位点差异倍数
FDR：甲基化位点的 FDR
3. 差异甲基化基因GO分析 4. 差异甲基化基因KEGG分析
E.m6Am-exo-seq样品要求
RNA: > 30-300 ug
血浆：> 5 mL
细胞：> 2 x 107
组织：> 100 mg
其他样品类型咨询021-64878766当地销售 题目：PCIF1催化m6Am mRNA甲基化调控基因表达
发表期刊：Molecular Cell
影响因子：17.97
文章链接：PCIF1 catalyzes m6Am mRNA methylation to regulate gene expression
mRNA修饰在调控基因表达中起着重要作用。其中m6Am是RNA修饰中一种丰度的修饰类型。本文中作者证明m6Am是由磷酸化的CTD作用因子1（PCIF1）介导的较为保守的mRNA修饰，它催化位于mRNA 5'端的RNA发生m6Am修饰。此外，PCIF1在体外和体内只催化5 端' m6Am的甲基化，而不催化m6A的内部甲基化。为了研究m6Am的生物学作用，作者利用m6Am-exo-seq表现了其转录组范围内的m6Am修饰情况，结果发现m6Am不会改变mRNA的转录或稳定性，但会对甲基化mRNA的帽依赖性翻译产生负面影响。因此本文鉴定了人类m6Am mRNA甲基转移酶PCIF1，并证明了PCIF1介导的m6Am mRNA甲基化的基因调控机制。 优势一：发表10分以上文章zui多的RNA修饰测序服务平台。云序已累计支持客户发表53+篇高水平文章，合计影响因子460+分，是国内支持发文zui多、累计影响因子zui高的公司。
优势二：至今完成4000+例RNA修饰测序样本，全面覆盖医口、农口等各类样本。
优势三：全面检测mRNA和各类非编码RNA（circRNA，lncRNA，Pri-miRNA等）。
优势四：提供RNA修饰一站式服务：RNA修饰整体水平检测、RNA修饰测序、MeRIP-qPCR验证、RIP和RNA pull-down等。
优势五：率先研发超微量MeRIP测序技术，RNA量低至500ng起。
优势六：国内zui全的RNA修饰测序平台，提供m6A、m6Am、m5C、m1A、m7G、m3C、O8G、ac4C乙酰化和2'-O-甲基化测序。
  m6A RNA甲基化测序
m6Am RNA甲基化测序
m1A RNA甲基化测序
m5C RNA甲基化测序
m7G （m3C）RNA 甲基化测序
2’-O-RNA氧化测序
ac4C乙酰化测序
o8G RNA氧化测序
比色法/LC-MS检测整体m6A甲基化水平
RNA修饰相关酶PCR芯片
ATAC-seq
ChIP-seq

往期回顾
项目文章|赫捷院士团队nature子刊揭示METTL3以m6A依赖的方式调控食管鳞癌
技术干货|MeRIP-qPCR方法及应用细谈
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Science新发现 |RNA以m6A依赖方式调节染色质状态和基因转录
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项目文章|m6A甲基化修饰对神经退行性疾病的重大发现云序客户余健秀课题组m6A方向再次取得重大发现——SUMO化促进YTHDF2结合m6A修饰的mRNA影响癌症进展
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